在人呼吸道合胞病毒（hRSV）抗病毒药物的研发过程中，动物模型是进行药效学评价和机理研究的重要工具。科研人员长期以来投入了大量精力，尝试构建多种hRSV感染或疾病动物模型。然而，现有模型普遍存在半容许性感染、感染持续时间短等局限，限制了其在hRSV致病机制研究和新药开发中的应用价值。
2022年8月，《Virus》杂志发表了一篇题为《Long-Term Infection and Pathogenesis in a Novel Mouse Model of Human Respiratory Syncytial Virus》的文章，报道通过CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Rag2基因，成功建立了一种可遗传的免疫缺陷小鼠模型。该模型预期能够支持人类呼吸道合胞病毒（hRSV）的长期感染，为研究病毒的慢性感染机制和病理过程提供了新工具。
图1.Rag2基因敲除小鼠构建策略的示意图
图2.hRSV感染模型建立的攻毒及采样时间表
研究者通过CRISPR在线工具crispr.mit.edu设计Rag2 sgRNA寡核苷酸（图1），将线性化的pT7-sgRNA载体与退火后的sgRNA片段连接，采用MEGA ShortScriptTM Kit（Ambion）进行体外sgRNA转录纯化。将转录得到的sgRNA与Cas9 mRNA显微注射至C57BL/6小鼠受精卵，并移植至假孕母鼠，获得F0代小鼠。
待小鼠养至3周龄后，将WT小鼠（N=24）和Rag2⁻/⁻小鼠（N=24）经鼻内途径接种hRSV Long株（图2）。接种前，以戊巴比妥钠溶液（15 mg/mL, 30 mg/kg）轻度麻醉小鼠，并缓慢将40 μL hRSV病毒悬液或DMEM培养液滴入小鼠鼻腔。
图3.Rag2基因敲除小鼠体重，体温与各呼吸器官病毒载量检测情况
Rag2基因敲除小鼠可在鼻腔、气管、肺等呼吸器官中高效支持hRSV病毒复制，其感染特征与临床患者上下呼吸道感染相一致。病毒在鼻腔和肺部的复制水平极高，鼻组织在接种后第11天平均病毒载量达到1×109.8copies/g ，肺部于同时达到峰值1×10⁹copies/g ）。值得注意的是，这种高效感染具有持久性，即使在实验第35天结束时，仍未观察到病毒滴度下降（图3），显示该模型能够维持稳定的长期感染状态。
hRSV感染Rag2⁻/⁻小鼠后，接种4天时鼻腔、气管未见明显病变，肺组织仅显示血管周围轻度单核细胞浸润；至第11天，鼻腔移行上皮出现变性伴炎性细胞浸润，下呼吸道表现为支气管肺泡扩张受压、中性粒细胞聚集（中心死亡降解、边缘存活）及肺泡间隔增宽等严重病变；至第35天，病变明显恢复。感染组与模拟处理的野生型小鼠均未出现炎性浸润等改变，表明hRSV可诱发其轻度间质性肺炎、严重支气管肺炎及化脓性支气管炎。本研究基于高易感性Rag2基因敲除小鼠，建立了可视化的体内药效评价模型，有望为未来治疗药物的研发提供可靠实验平台。
迪福润丝生物RSV体内药效评价动物感染模型
迪福润丝生物依托深厚的科研实力，已成功精准构建RSV-A2毒株BALB/c小鼠感染模型，并完成从模型验证到药效客观评价的全流程、一站式CRO服务体系建设。公司采用SPF级动物与标准化实验流程，确保数据精准可靠，为您提供从体内药效学到作用机制研究的有力支撑。
图5.迪福润丝生物一站式RSV动物感染模型体内药效评价服务
RSV-A2毒株BALB/c小鼠感染模型实验设计：
迪福润丝生物使用保护液收毒法，相较于常规冻融收毒法，病毒收毒滴度显著提高：
RSV体内动物模型药效评价：
图6.RSV-2攻毒小鼠肺脏活病毒滴度测定（空斑实验）
图7.RSV-2攻毒小鼠肺脏病毒载量检测（RT-qPCR）
研究团队采用空斑试验（病毒滴度检测金标准）与RT-qPCR（病毒载量精准定量）等多项技术，精准检测小鼠肺组织中的病毒含量，为客观评价抗病毒药物的给药效果提供关键、可靠的量化依据。
通过保护液收毒技术与空斑实验及RT-qPCR双检测体系的结合，迪福润丝生物打造了创新型RSV药效评价CRO服务平台，突破传统动物模型的局限。该平台提供从模型构建、攻毒方案到药效定量分析的一站式服务，为抗病毒药物研发提供低成本、高效率、可量化的全流程解决方案。
参考文献：
Xiong R, Fu R, Wu Y, . Long-Term Infection and Pathogenesis in a Novel Mouse Model of Human Respiratory Syncytial Virus. Viruses. 2022 Aug 9;14(8):1740.
关注福利：关注本公众号并连续3~5天转发任意2篇文章至朋友圈或行业交流群，即可领取迪福润丝定制周边礼品（充电宝、雨伞等）。详情请留言公众号或拨打客服电话咨询！
扫描下方二维码，添加「迪福客服」微信联系方式，便于您更快地与我们取得联系:
更多信息
联系电话 Tel：0571-86071385
邮箱 E-mail：op@diff-biotech.com
网址 Web：www.diff-biotech.com
Skype: dfrs-public@outlook.com